PCR за цитомегаловирус в кръвта и смазка
Няма коментари 7,250
Цитомегаловирус или CMV е общ вирус от семейството на херпес вирусите. Един от ефективните методи за неговото откриване е полимеразната верижна реакция или PCR. Диагнозата на вируса се извършва с високо прецизна технология, работеща на молекулярно-генетично ниво. CMV се открива в хронична / остра фаза или в латентен стадий (когато самата болест не се е проявила). PCR понякога е единственият тест за инфекция, когато други техники не работят.
Описание на метода
PCR е един от най-точните методи за откриване на CMV вирус. Надеждни данни се получават от биологичния материал, взет от пациента, в който се идентифицира и изследва генома на патогена, т.е. ДНК-частта на вируса. Количествено и качествено определяне на вируса се повтаря удвояване (усилване) на молекулата с ДНК чрез действието на ензими, за да се получи точно копие на избраната биологичния материал на пациента.
Това се прави в лаборатория на специален реактор. Реакцията на възпроизвеждането се осъществява на няколко етапа, поради което се нарича верига. Полученият материал ви позволява визуално да изследвате извадката, да я сравнявате със стандарта в базата данни, да установите диагноза, въз основа на която се прави изборът на режима на лечение.
Предимствата и недостатъците на метода
PCR диагностиката е надарена с много плюсове, главните от които са:
- Възможността за провеждане на тест с голям набор от биологичен материал:
- изстъргване от уретрата, шийката на матката, влагалището;
- урина, слюнка, цереброспинална течност.
- Времето от събирането на материала до получаването на резултатите от изследването не надвишава 2 дни.
- Висока чувствителност на PCR метода, който позволява да се открие патоген в сегмент от CMV ДНК. Поради това предимство заболяването се открива рано в латентната или персистираща форма на инфекция.
- Точността на метода при изследването на всякакви човешки течности и тампони е 90-95%. Но вирусът може да присъства в различни тъкани, не само в изследваните.
- Грешката при теста не надвишава 3-5%.
Въпреки високата ефективност и точност, методът има недостатъци:
- Ниска специфичност и ниска прогностична стойност. PCR не позволява да се разграничи латентната фаза на жизнената активност на вируса от активния стадий на заболяването.
- Невъзможност за диференциране на първична CMV инфекция от повторно реактивиране на хронична форма.
- Трудности при оценката на ограничаването на инфекцията, степента на патогенност и агресивността, присъщи на цитомегаловируса.
- Липса на предсказуемост на заболяването.
- Необходимостта от използване на допълнителни диагностични методи, например ELISA (за изясняване на данните).
Материали за изследвания
При PCR диагностиката, различни течности на човешкото тяло се изследват на CMV, така че може да се наложи да преминат:
- засяване от устата;
- кръв;
- урина;
- смазка от устата (храчка);
- изстъргване от уретрата или влагалището;
- цереброспинална течност;
- кърмата.
Подготовка и правила за преминаване на анализа
Точността и надеждността на резултатите от теста за PCR се определя от:
- качество на реагентите;
- степен на квалификация и внимание на лабораторния персонал;
- спазването на необходимите правила за подготовката на пациента.
Основните изисквания за преминаване на тестовете за CMV чрез PCR:
- Преди проучването трябва да отмените приемането на антибиотици и антибактериални средства 2 дни преди очакваното доставяне на биоматериал. Анулирането на други лекарства се договаря с лекуващия лекар.
- В навечерието на кръводаряване за PCR не можете да пушите поне 60 минути.
- Не пийте алкохол, не яжте мазна храна 2 дни преди изследването.
- Преди доставянето на биоматериал за PCR не се препоръчва да се подлагат на радиография, ректални прегледи, редица физиотерапевтични процедури. Те могат да повлияят на резултата, причинявайки промени в цитомегаловируса.
- Доставянето на кръв става сутрин и на празен стомах. Допуска се доставяне вечер, но след гладуване за 6 часа.
- Остъргването от влагалището, цервикалният канал се предава при следните условия:
- за един ден да не спринцовка, да не въвеждате лекарства;
- за 3 дни е необходимо да се избягват сексуални контакти;
- когато давате анализ преди зачеването, остъргването се извършва на 5-ия ден от началото или до 5-ия ден преди планираното завършване на менструацията;
- Остъргването от уретрата се извършва не по-рано от 2 часа след последното уриниране.
- Течността от пикочния мехур се събира у дома (сутрин и на празен стомах) и се връща в лабораторията не по-късно от 3 часа след събирането.
- Анализът на слюнката се извършва по следния начин: преди да се получи смазка, се изисква да не се яде, да не се четка зъбите. Тези манипулации могат да доведат до промени в слюнката, което ще доведе до неверни резултати.
Времето на PCR анализа
Резултатът ще бъде готов до 2 дни след доставката на биоматериал. Понякога резултатът е готов на първия ден.
Тълкуване на резултатите
Положителен отговор се вижда от следните данни:
- В проба от биоматериал се откриват ДНК фрагменти с цитомегаловирус, което показва инфекция с вируса;
- В пробата се съдържа урея, което показва нарушение на правилата за депониране на биоматериал и получаване на фалшив положителен отговор.
Отрицателният отговор се разкрива от следните данни:
- в пробата няма ДНК фрагмент, който е характерен за цитомегаловируса;
- в биоматериалите не са налице достатъчни епителни клетки за откриване на вируса поради нарушаване на правилата за вземане на проби за анализ.
Резултатите могат да бъдат дадени в проценти.
Когато се вземат кръв и други течности, се определя нивото на антителата:
- IgM за оценка на първична инфекция с вируса или диференциране на острия хроничен стадий на инфекция, които биха могли да се появят през последните 2-4 месеца;
- IgG за откриване на инфекция, но без определяне на момента на инфекция и активността на вируса.
Ако възрастен с добра имунна система има наличие на CMV в смазка, урина или ожулвания, не е необходимо специално лечение.
Следователно, наличието на антитела срещу вируса и получаване на положителните резултати от PCR диагностика или култура в отсъствието на CMV в клинично заболяване не са причина за лечение терапия антивирусно инфекция.
Видове анализи за цитомегаловирус (CMV) и тяхното тълкуване
За здрав човек цитомегаловирусът не е твърде опасен, но при определени обстоятелства може да доведе до сериозни усложнения. Отдаване под наем анализ цитомегаловирус е от особено значение за жените, които носи едно дете и се планират бременност, за деца, само се е появил, тези, които са закупени или вроден имунен дефицит и изкуствено. Колкото по-рано е изследването, толкова по-ефективна е терапията, така че тестовете трябва да бъдат направени незабавно, когато се появят първите подозрения за болестта.
Характеристики на патогена
Първо, помислете какво е цитомегаловирус. Принадлежи към семейството на херпес вируси, което включва и варицела, причинителя на мононуклеоза на Epstein-Bar, херпес симплекс тип I и тип II. Името се оправдава от специфичните промени, които клетките претърпяват под въздействието на патогена - техните размери значително се увеличават.
След заразяването, вирусът може да проникне почти във всички телесни течности, съответно за откриването му, урината, кръвта, вагиналното изпускане и други материали. Прониквайки в човешкото тяло, този патоген често остава там завинаги, днес цитомегаловирусът се открива при юноши в около 15% от случаите, при възрастната популация от 40%. Едно от опасностите на вируса е сложността на неговото откриване:
- Продължителността на инкубационния период е до два месеца, през което време може да липсва симптоматиката.
- Под влиянието на стресова ситуация, тежка хипотермия или намаление на имунитета възниква рязко избухване и заболяването е погрешно за ARVI или ARI. Като се има предвид, че болестта има подобна симптоматика - температурата се повишава, общата слабост и главоболието се наблюдават.
- С невъзможността за своевременно разпознаване на патология, пневмония, енцефалит или артрит се развиват други патологии.
Как се появява инфекцията и на кого е показан анализът
начини на заразяване са разнообразни - при възрастни институт може да се предава по полов път, новороденото по време на дейности, раждане на майката или по време на кърмене, цитомегаловирус, дете на възраст над очевидно след контакт със заразени връстници, проникващи в организма със слюнката. Въпреки факта, че патологията може да бъде открита при дете, в 50% от случаите страдат хора, навършили 35 години или повече.
Предвид всичко това, е възможно да се отделят определени категории сред населението, на което е показан анализът за цитомегаловирус:
- Жените, които носят дете и тези на най-справедливия пол, които са подложени на предучилищно обучение (набор от мерки, насочени към пълно зачеване, период на бременност и раждане на здраво бебе).
- Новородени бебета.
- Деца, които често имат ARVI.
- Пациенти с имунен дефицит, както вродени, така и придобити, включително ХИВ.
- Пациенти от всички възрасти с наличие на злокачествени новообразувания.
- Пациенти, приемащи цитотоксични лекарства.
- Засегнати от клинични симптоми на цитомегаловирус.
Жените, които планират да забременеят, или вече тези, които са регистрирани в ранните стадии на бременността, анализът за цитомегаловирус се прави веднага, когато посетите здравно заведение. Необходимо е да се направи анализ на антителата срещу цитомегаловирус, който помага да се идентифицира броят им и да се определи дали жената е имала този вирус преди и дали има имунитет към патогена.
Ако анализът показва, цитомегаловирус антитела Anti-CMV IgG, риск за плода е сведена до минимум - бъдещата майка вече болен развита патология и защита, което ще осигури и бебе. В отсъствието на антитела се изследват за вируса не са провежда веднъж по време на бременност, тъй като тялото не е готова да устои на инфекция.
При кърмачета, само се е появил, кръвен тест за цитомегаловирус или урината се извършва в случай, когато следят бременна жена има съмнение за възможността от вродена инфекция или придобита по рождение патология. Диагнозата се извършва през първите 24-48 часа след раждането на бебето.
При наличие на имунна недостатъчност, тестът се извършва незабавно след откриването му. Подобен подход ще позволи да се коригира терапевтичният курс и да се допълни схемата с необходимите антивирусни лекарства, като се избягва възможна релапс или подготовка за неуточнена първична инфекция.
Анализът на CMV е необходим и при подготовката на пациент за имуносупресия при органна или тъканна трансплантация и проучването е предписано преди началото на процедурата.
Видове правила за изследване и доставка
В присъствието на нормален имунитет е повече от реално да се заразите с вирус и нямате представа за това. Имунната система успешно ще проведе цитомегаловирус в състояние на депресия, а дори и в случай на патология симптоми са напълно отсъства. Ако имунитета на лицето отсъства или е отслабена, което е особено забележимо в HIV-инфектирани пациенти с ракови тумори, CMV е в състояние да предизвика развитието на остри патологии. Налице е загуба на очите и белите дробове, мозъка, храносмилателна система, което води до усложнения често става фатално.
За да се определи наличието на патология, е необходимо да се провери кръвта за антитела и може да има няколко вида анализи, но имуноанализът се счита за най-надежден. ELISA ви позволява да определите броя и свойствата на специфичните анти-CMV, а резултатите от декодирането на кръвния тест за цитомегаловирус служат като основа за оттегляне не само на наличието на носител на инфекция, но и на присъствието на имунитет. Освен това, този метод е най-бързият, най-точните и най-достъпни.
Диагностицирането на наличието на патология ще помогне за провеждане и други проучвания, сред които:
- полимеразна верижна реакция, която прави възможно откриването на ДНК на вируса;
- Цитостопсия на урината, в хода на която се наблюдават увредени клетки;
- Методът на култивиране, който се състои в отглеждане на вируса върху хранителни среди.
В човешкото тяло съществуват различни видове имуноглобулини, но ако считаме цитомегаловирус, IgM, IgG са ефективни. Първият тип се развива в началния стадий на инфекция, осигурявайки потискане на първичната инфекция. Вторият тип се генерира по-късно и е предназначен да предпазва тялото от цитомегаловирус през следващия живот на жертвата.
Важен факт. Първият IgG, образуван като отговор на инфекцията, се асоциира с вирусни частици много слабо, в този случай те се считат за с ниска алоегия. След приблизително 14 дни започва производството на силно амиден IgG, които се характеризират с достатъчна ефикасност и са способни лесно да разпознават и свързват вирионите.
Определението за безвредност е необходимо за установяване на предписването на инфекция. В този случай липсва концепцията за "норма" за IgG като такава - ако се установи кръвен тест по време на кръвен тест, независимо от неговата стойност, патологията е очевидна. Сега, за какви свойства имаме серологичните маркери IgM и IgG, ние ги разглеждаме заедно с илюзията на IgG по-подробно, за която има обобщена таблица:
Що се отнася до молекулярните диагностични методи, те се отнасят директно: те позволяват да се определи наличието на патогени в изследваните материали. В този случай изборът на биологичен материал се извършва, като се вземат предвид развитието на етапите на патологичния процес, неговите клинични прояви и целите на провеждането на лабораторни изследвания.
Най-често кръвта се използва за изследване, но трябва да се има предвид, че патогенът не винаги присъства в нея, съответно, ако инфекцията е отрицателна, инфекцията може да съществува в организма. За потвърждение са необходими допълнителни тестове.
Сега как да направите анализа. Проучването за цитомегаловирус не се различава от обичайните кръвни тестове, взети от вената. В някои случаи се изисква изследване на урина, слюнка или амниотична течност. Нито един от тестовете не изисква никакво специфично обучение, с изключение на това, че кръвта се очаква да бъде доставена на празен стомах. След като анализът бъде предаден и резултатите са получени, те се дешифрират от квалифицирани специалисти.
Как да дешифрираме резултатите
Декодирането на анализа по форма е тигър на IgG антитяло. Както споменахме по-горе, стандартът за този показател не е предвиден - той може да се колебае на фона:
- състоянието на имунната система;
- наличието на хронични патологии;
- общото състояние на организма;
- обичайния начин на живот.
Трябва да се има предвид, че IgG се генерира не само по време на инфекция, но и по време на периоди на обостряне и остава в организма след трансферираната патология. Поради тези причини, резултатите от цитомегаловирусния анализ може да са съмнителни и биоматериалните изследвания често се повтарят.
Съвременните лаборатории имат многобройни системи, които им позволяват да откриват антитела срещу цитомегаловируса. Тяхната чувствителност е различна, както и съставът на компонентите. Но има и обща характеристика - всички те са предназначени да провеждат ензимен имуноанализ. Установените норми в този случай също отсъстват.
Декодирането на резултатите от ELISA се извършва въз основа на нивото на оцветяване на течността, в което се добавят биоматериалите, които трябва да бъдат изследвани. Полученият цвят се сравнява с предварително приготвени проби, както положителни, така и отрицателни.
За по-бързо декодиране, лабораторните техници използват тестова система с правилно разреждане на кръвта, което позволява да се съкрати времето за получаване на резултатите. Всеки медицински център използва собствени титри за диагностика, като използва референтни показатели, които дават отрицателен или положителен резултат.
Резултатите от анализа показват средните показатели - крайната стойност от 0,9, ако делът е определен като 0,4. Нормата за това е степента на оцветяване на пробата, в която липсват антитела към вируса. Ето таблицата за примерно декодиране:
Какво е PCR диагнозата на цитомегаловирус
При планирането на бременността всеки трябва да премине анализ на цитомегаловирусната полимеразна верижна реакция (PCR). Освен това, защо е необходимо? Има толкова дългогодишна шега: има абсолютно здрави хора, има недостатъчно проучени. За съжаление тук можете да намерите само малка част от шегата, защото всъщност всичко е доста сериозно. Например, 80% от възрастните имат антитела срещу цитомегаловирус, което нашите родители дори не са чували ясно, че за откриване на микроба, защото това е един такъв анализ може да разкрие няма следи от присъствието му в организма (както в изследването на кръвта за наличие на антитела), и самия вирус,
Един от многото
Всъщност, преди около 20 години малко хора знаеха за цитомегаловирус, с изключение на лекарите. Факт е, че за мнозинството от населението не е много опасно, тъй като причинява симптоми, подобни на тези на ARVI. Струва си да се повтаря: антителата срещу микроорганизмите се откриват при повечето възрастни, но всички те не дори подозират, че някога са страдали от или са носители на CMV.
Въпреки това, един и същи вирус може да предизвика патологии за развитие на плода, усложнени или преждевременно раждане. Той също така причинява образуването на сериозни патологии при хора с намален имунитет, например с вродена или придобита имунна недостатъчност.
Освен това цитомегаловирусът при дете под 5-годишна възраст допринася за честите катарални заболявания, които се появяват при усложнения (бронхит, пневмония и т.н.).
Този вирус принадлежи към семейството на херпесвирусите. Инфекцията се случва главно при контакт с биологични течности - слюнка, кръв, кърма, семенна течност или вагинална слуз. Възможно предаване и въздушно, контактно домакинство, но има по-малко такива случаи.
Както вече бе споменато, симптомите на инфекция са много подобни на SARS: телесната температура се повишава, влошаване на здравето, възможно мускулна болка, гадене. След възстановяване, малко количество антитела срещу вируса може да се открие в кръвта - остава имунитет през целия живот, ако тялото е преодоляло заболяването. Но повечето от цитомегаловирус Продължава да се разпространява в латентна форма, т.е., не се докаже, толкова дълго, колкото човешката имунна система не е отслабена през настинки, тежък стрес и така нататък.
С една дума, се държи по същия начин като типичен вирус, който причинява ARVI, живее само в тялото през цялото време. Успокоява, че за възрастен с нормален имунитет, той не е опасен, тъй като няма специфично лечение, а неспецифичният има ниска ефективност.
Как да идентифицираме микроорганизми
Точната диагноза на цитомегаловирус е възможна само с PCR. Това е най-точната и информативна техника, която ви позволява да намерите вирус във всяка биологична течност. Методът на PCR може да разкрие ДНК на микроорганизми при изкуствени условия (in vitro) с висока точност, грешката не надвишава 3-5%, това е наистина най-добрият индикатор. В този случай диагнозата на цитомегаловирус е възможна на най-ранните стадии преди проявата на симптоми, която е особено важна при планиране на бременност или имунен дефицит. Така че, можете да идентифицирате вируса в латентна или упорита форма.
Принцип на диагностика
По време на верижната полимеразна реакция се извършва увеличаване на малък фрагмент от нуклеиновата киселина (ДНК), получен от биологичния материал. С възможността за увеличаване на фрагменти, е възможно да се възпроизведе цялата верига, както и всяка уникална ДНК на организма, се оказва лесно идентифициране на причинителя.
Такова копиране на фрагменти се извършва с участието на ензими. Копирането само на частта, която отговаря на дадените условия, естествено, ако тя присъства в биоматериалите. Експерти знаят коя ДНК има цитомегаловирус, с каква последователност от двойки аминокиселини. Изследвайки пробата от течността, взета за анализ, проверете дали има съответни фрагменти в нея. Ако отговорът е "да" - те се разделят и се извършва PCR.
Предимствата на този вид изследване са безспорни:
- директно откриване (открива се жив вирус, а не следи от неговата жизненоважна дейност);
- висока специфичност, без вероятността от фалшива идентификация на патогена;
- възможността за откриване на няколко микроорганизми в една проба;
- идентифициране на хронични, латентни форми на инфекции;
- откриване на вътреклетъчни паразити;
- Откриване на патогени с висока антигенна вариабилност.
Какви течности може да се изследват:
- кръв;
- урина;
- слюнка;
- храчки;
- освобождаване от уретрата;
- кърма;
- вагинално отделяне;
- цереброспинална течност.
Декодиране на резултатите от PCR
Диагнозата на цитомегаловирус се извършва бързо и винаги дава недвусмислен резултат, положителен или отрицателен.
Отрицателна е тази, при която в изследваната проба не е открита следа от търсената инфекция. Следователно, човекът е здрав, не е носител, а неговите проблеми са причинени от друг патоген (ако диагнозата е извършена на пациента с определени оплаквания). Ако вирусът е открит, това означава, че той се намира в тялото. В зависимост от особеностите на случая се взема решение за лечение, предотвратяване на усложнения и т.н.
По този начин стойността на резултатите винаги е точна. Допълнителни изследвания, същият анализ за антитела, могат да разкрият количеството на вируса, а след това какви промени в организма той вече е успял да причини.
Колко лечение е необходимо
Фактът, че вирусът е открит, не означава, че е необходимо да се победи алармата и спешно да се лекува. В тези случаи, когато един възрастен е изследван без проблеми с имунната система, не се изисква терапия. Често болните деца, които имат студ със усложнения, се нуждаят от засилване на имунитета и навременна корекция на разкритите патологии на вътрешните органи. Какви са положителните резултати от анализа за бъдеща майка? На първо място, по-внимателно отношение към здравето на човек, както и приемане на имуномодулатори, витамини, укрепване на имунитета.
Но цитомегаловирус, открит по време на изследването, не означава невъзможност за бременност или задължително раждане на дете с патологии. Много жени раждат здрави деца без усложнения и едва тогава имат антитела срещу вируса.
Поради това, конкретно лекарство срещу тази инфекция не съществува в действителност, както и срещу повечето от вирусите. Но тъй като самият орган може да го преодолее, има една, универсална за всички препоръка: трябва да укрепите имунитета. Здравословен начин на живот, втвърдяване, спорт - всичко това увеличава устойчивостта на тялото, т.е. ако има инфекция, то ще може да се справи с вируса. Това важи както за деца, така и за възрастни.
Кръвен тест за цитомегаловирус
Цитомегаловирусът е вирус на херпес симплекс тип 5. За да разкрие, че ще помогне анализ на цитомегаловирус. Веднъж в тялото вирусът остава завинаги. Без значение колко усърдно е бил опитан да излекува и унищожи, той оцелява. Броят на вирусните клетки в тялото намалява поради лечението, като се постига количествена норма. Както знаете, херпесният вирус може да бъде в тялото, но не се показва дълго време. В този случай става въпрос за таен превозвач.
Диагностика на инфекцията
Жените, които планират бременност, препоръчват диагноза в специализирана лаборатория (например PCR) за броя на антителата срещу вируса. При използване на метода на PCR може да бъде открита вирусна ДНК. Неговото присъствие в изследваните биоматериали е доказателство за наличието на вируси. Ако ДНК на вируса в материала не е намерена, резултатът от изследването е отрицателен.
През последните години лекарите обърнаха специално внимание на диагнозата на вируса при бременни жени и тези, които планират бременност, тъй като причинителят на херпесната инфекция може да предизвика появата на патологии в плода. С CMV в много случаи следните патологии са свързани с деца:
- пневмония;
- нарушения на умственото и физическото развитие;
- патология на слуха, зрението;
- други нарушения.
Кръвният тест за цитомегаловирус помага за откриването на инфекцията. Най-популярният метод за диагностициране на цитомегаловирусна инфекция сега е да се определи наличието на имуноглобулини G (IgG) в кръвта. Съдържанието на тялото на антитела от клас G на този вирус се изразява в относителни единици, които могат да се различават в лабораториите, използващи различно диагностично оборудване.
Наличието на антитела от клас G в организма не е патология, а нормата. Почти всички хора, живеещи на Земята, са носители на цитомегаловирус. Развитието на антитела срещу вируса е естествена и абсолютно нормална реакция на организма към наличието на инфекция. Наличието на IgG имуноглобулини в кръвта показва, че човешкото тяло е имунно спрямо цитомегаловируса. В допълнение, наличието на IgG показва, че човек е носител на вирусна инфекция.
Какво е нормалното съдържание на антитела срещу инфекция?
Количественото съдържание на имуноглобулините в кръвта се изразява като титър. Последното е максималното разреждане на серум на пациента, при което реакцията е положителна. При лабораторни изследвания серумът най-често се разрежда в кратни на 2 (например 1: 2, 1: 4, 1: 6). Титърът не може да покаже точния брой молекули на антитела, но показва обща картина на активността на антителата.
Има така наречен диагностичен титър, който се използва при декодиране на антитяло за кимвали. Имунологичните лаборатории имат различни системи за тестване. Всяка система за изпитване има свое собствено ниво на чувствителност, както и специфичен компонентен състав. Въпреки тези различия, всички тестови системи работят на базата на принципа на ензимния имуноанализ (ELISA).
Резултатите от изследването при извършване на ензимния имуноанализ се оценяват от степента на оцветяване на разтвора (оптичната плътност на разтвора), в която се прибавя кръвният серум на изследваното лице. Получените проби се сравняват с наличните контролни проби.
Как да дешифрираме анализа?
За да се направи тълкуването на анализа, е необходимо да се сравнят получените изследователски показатели с данните от формуляра. Индикаторите могат да бъдат изчислени в различни мерни единици: UE (конвенционални единици), оптични единици и т.н. В случаите, когато индикаторите не са посочени в изследователските формуляри, стандартите отговарят на нормата, лабораторията самостоятелно дешифрира всички получени данни.
За да се определи степента на активност и развитието на инфекцията, е необходимо да се оцени степента на асоцииране на антигена и антитялото (avidity) на IgG. Ако е ниско, това е признак за скорошна инфекция (първична инфекция). Висока степен на аритмичност е характерна за носителите на вируса, заразени в продължение на много години или от раждането.
В случай, че индексът на аритмичност при анализиране на avidity на IgG за cMV е 50-60%, е необходимо да се проведе второ проучване след 2 седмици. Тази стойност на индекса е прагова стойност, т.е. тя е приемлива норма. С индекс на авидност по-малък от 50% показват наличието на ниски антитела, което показва първична инфекция. Стойността на индикатора надвишава 60% в каретата с възможна продължителна хронична инфекция. Отрицателен резултат означава, че никога не е имало контакт с инфекцията, а вирусът отсъства в организма.
Най-информативен е изчерпателното изследване на биологичните материали на пациента за наличието на вирус.
Това е комбинация от имунологични, молекулярно-биологични диагностични методи:
- ELISA за IgG, IgM;
- имунитетът на имуноглобулин G;
- PCR.
В резултатите от анализа за определяне на агресивността на IgG са налице следните индекси: IgM, IgG, avidity, PCR анализ. Всичките 4 показателя дават най-пълната картина за наличието или отсъствието на вирус в човешкото тяло. Анализът е както следва:
- Когато всички изброени показатели (IgM, IgG, резултатът от PCR анализа) са отрицателни (avidity не определя), това показва пълна липса на инфекция.
- Ако IgM е положителен, IgG е положителен или отрицателен, аритмичността е ниска, PCR е положителна, тогава инфекцията с вируса е основна. Най-вероятно контактът с вируса е станал наскоро.
- IgM е положителен или отрицателен, IgG е положителен, аритмичността е на праговото ниво, PCR е положителен. В тази ситуация ни се казва за късния етап на първичната инфекция.
- IgM отсъства, IgG е положителен (титърът на антителата е висок), абитността е над праговата зона, PCR е отрицателен. Такива резултати от проучването показват латентен стадий на инфекция. CMV понастоящем е неактивен, въпреки че е налице в организма.
- IgM - резултатът е положителен или отрицателен, IgG е положителен, степента на авидност е ниска, PCR е положителна. Такива индекси показват етапа на реактивиране на цитомегаловируса.
Преди да се извършат анализи по метода на ELISA и PCR, не се изисква специална подготовка на пациента. Достатъчно е да спазвате няколко условия: да давате кръв на празен стомах и да се избягвате да ядете мазни храни няколко дни преди теста за извършване на вируси.
Цитомегаловирусна инфекция
Цитомегаловирус (CMV) или вируса на херпес симплекс тип 5, - ДНК-съдържащ вирус на семейство Herpesviridae цитомегаловирус Hominis субфамилия Betaherpesvirinae. Цитомегаловирус (CMV), човешки - anthroponotic хронично вирусно заболяване се характеризира с различни форми на патологичен процес и клинични прояви - от латентна инфекция на генерализирано симптоматично заболяване. CMV заболяване, класифицирани в зависимост от условията и механизмите на инфекция (вродени и придобити инфекция, пренатални, постнатални и intrapartum), степента на вирусна активност (латентна, устойчиви и активира инфекция), първична или повторна инфекция (остра инфекция, реинфекция или реактивация на вируса).
Отличителните белези на инфекцията са способността на CMV да продължи да съществува в много органи и способността й да заразява почти всички клетки на човешкото тяло, което предопределя разнообразието от клинични прояви както при вродени, така и при придобити форми на инфекция. CMV се счита за основния причинител на вътрематочната инфекция, която има различни резултати: от инфекция без инфекция, образуване на малформации и заболяване на новородените преди зародишна смърт и мъртво раждане.
CMV е типична антропоноза. Източникът на инфекция е болен човек или носител на вируси. Пътища на предаване: вертикални, сексуални, въздушни, фекално-орални, официални (парентерални). Факторите на предаване са кръвни, цервикални и вагинални тайни, сперма, женско мляко. Вирусът се екскретира в урината, изпражненията, слюнката, храчките, в по-малка степен - със слъзна течност. Инфекцията може да възникне и при кръвопреливания, трансплантация на органи и тъкани. Цитомегалия е широко разпространена инфекция, сред пълнолетното население на Руската федерация, 73-98% имат AT-CMV.
CMVI принадлежи към опортюнистични инфекции, особено опасни за пациенти с имунна недостатъчност от различен характер. Имуносупресията води до реактивиране на латентна инфекция и до развитие на явни варианти на заболяването с поражение на различни органи и системи, които могат да доведат до смърт. Manifesto CMVI е едно от първите места в структурата на опортюнистичните заболявания при HIV-инфектирани пациенти. Тази патология се среща при 20-40% от пациентите със СПИН, които не получават антиретровирусна терапия. Клинично експресираният CMV е едно от сериозните инфекциозни усложнения при трансплантация на органи, инфекцията изостря процесите, водещи до отхвърляне на трансплантацията.
С постоянството на CMV в човешкото тяло се отличават два етапа, които се заместват един друг - продуктивни (с репликация на вируса) и латентни. Освобождаването на вируса от латентния етап означава реактивиране, което може да бъде предварително определено от намаляването на имунореакцията или появата на други фактори, допринасящи за неговото възпроизвеждане. Идентификация на директни маркери за вирусна репликация (виремия, ДНК или АХ) показва инфекция.
При първичната инфекция на 5-ия и 7-ия ден се получава Ig IgM, след 10-14 дни - нисък клас АТ IgG, а след това постепенно аритмичността на тези АТ нараства, те стават високо вискозни. IgM антителата изчезват в рамките на един месец, при ниски дози AT IgG - след 1-3 месеца, силно развиващите се АТ IgG циркулират в кръвта на носителя за цял живот. При първичната инфекция в стадия на "серологичния прозорец", преди началото на АТ синтеза, настъпва активна репликация на вируса, през този период единственият маркер на инфекцията е ДНК на вируса в кръвта. При реактивиране, появата на АТМ IgM и / или IgA, както и на ниско AT IgG; в пика на реактивацията се открива ДНК или AG CMV в кръвната плазма.
Решаващо е зародишен CMV виремия поради майката първична инфекция или повторно вирус или негов реактивиране. CMV е в състояние да преодолее плацентарната бариера и да повлияе на плода при различни стадии на бременност, причинявайки вродена инфекция. Според различни автори, активната форма на CMV инфекция е открита при жените с обременени акушерска история в 35-60% от случаите. Секция порта за вируса в зародишен и intrapartum период на бременност може да бъде плацента и фетални мембрани в неонаталния период и по-късно - на дихателните пътища и храносмилателния тракт, и възможно замърсяване чрез кръв.
CMV има благоприятно невротропно, epiteliotropnym, хепатотропен и cardiotropic ефект върху плода. Ефектът може да бъде медиирано, което води до различни аномалии в плацентата: плацентата циркулация разстройство matochno-, отклонението в еволюционен образуването на плацентата. Клинична еквивалентни на тези заболявания може да бъде да се намали продължителността на бременност и преждевременно раждане, раждане на деца със симптоми на хипоксия прехвърлени или признаци на зародишен недохранване, обща вътрематочно растеж.
Най-голямо значение за развитието на ранните перинатални фетални лезии има хематогенен път на инфекция. В допълнение, за вътрешно ранните и по-късни лезии, вертикалните и контактните пътища на CMV предаването са характерни, а случаите на смесена инфекция също са чести. Острата CMV може да възникне под формата на обобщена форма с прикачване на вторични инфекции и да има смъртоносен изход през първите седмици от живота на детето. Когато плодът се зарази по време на реактивирането на латентен CMVI, късни прояви на инфекция се появяват под формата на визуално, слухово, умствено изоставане, двигателни нарушения. При отсъствието на изразени имунологични нарушения, острата CMV става латентна с цялото съществуване на вируса в човешкото тяло. Развитието на имуносупресията, особено свързано с HIV инфекцията, води до възобновяване на репликацията на CMV, появата на вируса в кръвта и проявата на заболяването. Смъртността на пациентите с HIV инфекция, страдащи от CMV, е 25-27%.
Клиничната диагноза на CMV инфекцията изисква задължително лабораторно потвърждение. Откриването на IgM и / или IgG в кръвта на пациента не е достатъчно, за да установи факта на активна репликация на CMV, нито да потвърди явната форма на заболяването.
Индикации за изследване
- Жени, планиращи бременност;
- жени с анамнеза за акушерство (перинатална загуба, раждане на дете с вродени малформации);
- бременни жени (главно с ултразвукови признаци на вътрематочна инфекция, лимфаденопатия, треска, хепатит и хепатоспленомегалия с неизвестен произход);
- бременни жени с имунен дефицит, включително HIV инфекция;
- майките, които раждат дете със признаци на вътрематочна инфекция или вродени малформации;
- деца със симптоматична вродена инфекция, малформации или тези, родени от жени, изложени на риск от вътрематочен трансфер на CMV;
- пациенти (особено новородени) със сепсис, хепатит, менингоенцефалит, пневмония, гастроинтестинални лезии;
- пациенти с наличие на имунна недостатъчност с клинична картина на орган или генерализирани лезии.
- Вродени CMVI - рубеола, токсоплазмоза, неонатален херпес, сифилис, бактериална инфекция, хемолитична болест на новородени, травма при раждане, наследствени синдроми;
- мононуклеоза болест - инфекция, причинена от вируса на Епщайн-Бар, херпес вируси 6 и 7 вида остра ХИВ инфекция, стрептококова ангина, остра левкемия дебют;
- респираторно заболяване при малки деца - магарешка кашлица, бактериална или трахеит трахеобронхит, RS-вирусна инфекция, херпесна трахеобронхит;
- имунокомпрометирани пациенти - пневмония, пневмония, туберкулоза, токсоплазмоза, микоплазма пневмония, гъбични и херпесни инфекции, бактериални сепсис, лимфопролиферативно заболяване, HIV енцефалит, невросифилис, прогресивна мултифокална левкоенцефалопатия;
- полиневропатия и poliradikulopatiya - poliradikulopatiya причинени от херпес вируси типове 2 и 6, синдром на Guillain-Barre, токсична полиневропатия, свързана с приемането на лекарства, алкохол, лекарства, психотропни вещества.
Етиологичната лабораторна диагностика включва микроскопски изследвания, откриване на патогени в клетъчна култура, откриване на АН или ДНК, определяне на АТ IgM, IgA, IgG, авидност на АТ IgG.
Материал за изследване
- Кръв (серум, плазма), кръвни левкоцити, урина, слюнка, изследвания на КЧС - култура, откриване на ДНК;
- кръв от пъпна връв, амниотична течност - откриване на ДНК;
- слюнка, урина - откриване на хипертония;
- серум / плазма на кръвта - определение на AT.
Сравнителни характеристики на лабораторните диагностични методи. Използването на PCR метода позволява да се определи наличието на ДНК вирус в тъканите и биологичните течности. Проучването има висока специфичност (100%) и чувствителност (85-100%). ДНК на CMV може също да бъде открита с латентен CMV, което показва продължителното репликиране на вируса дори при отсъствие на клинични симптоми на заболяването. Използването на PCR в реално време позволява да се определи нивото на виремия ("вирусен товар") в кръвта и CSF.
Изолиране на вируса от кръвни левкоцити, урина, слюнка, цереброспинална течност, сперма, и т.н. В клетъчна култура за дълго време, наречен "златен стандарт" за диагностициране на CMV инфекция. В днешно време, с появата на силно чувствителни и специфични молекулярни биологични техники, вирусологични изследвания вече не се радва на командващ позиция в лабораторната диагностика на CMV инфекция. Това се дължи на особеностите на вируса - в отглеждането на резултата засегнати от нестабилността на CMV до промяна на температурата и замръзване, както и необходимостта да се провеждат изследвания в специално оборудвана вирусология лаборатория, която обикновено не разполагат с необходимите съоръжения за медицинска. В допълнение, вирусологичен проучване не може да се прави разлика между първичната инфекция на рецидивиращи форми на CMV инфекция, особено в асимптоматични. Някои лаборатории използват "метод бързо култура" с предварително въвеждане на биоматериала в фибробластен култура и идентифициране на CMV цитопатичен ефект, когато се използва RIF.
За откриване на AH на вируса в слюнката и урината се използва RIF метод, количеството на светлинните клетки може приблизително да оцени интензивността на изолиране на вируса. Във връзка с персистирането на CMV, откриването на AH не показва активността на инфекциозния процес, необходими са допълнителни проучвания за неговата оценка - откриването на отделни вируси на AH (p55, pp65 и т.н.).
При извършване на микроскопско изследване (светлинна микроскопия), основните морфологични характеристики на CMVI са гигантски клетки с интрануклеарни включвания (цитомегалия). Те могат да бъдат намерени в епитела на бъбречните тубули, жлъчните пътища, отделителните канали на слюнчените жлези, панкреаса, белодробната тъкан, глиалните клетки, невроните, ендотелиоцитите. Наличието на такива клетки показва възпроизвеждането на вируса, но те не се откриват във всички случаи на активна инфекция. Диагностичната чувствителност на метода не надвишава 50%.
За да се определи AT-CMV, обикновено се използва методът ELISA. Наличието на IgM Ig е доказателство в полза на остра инфекция или реактивиране. Реактивирането е много по-често придружено от хиперпродукция на АТ IgA, отколкото IgM. Откриването на Ig Ig е с ниска диагностична стойност. тест диагностична стойност увеличава определение ненаситеност IgG антитела: откриване на нисък авидитет IgG антитела показва текущата или скорошно CMV инфекция, понижаване на индекса на авидитет възможно активиране. Откриване vysokoavidnyh AT елиминира основната инфекция, обаче активиране може да се случи в присъствието на най-vysokoavidnyh че потвърждава чрез откриване на CMV, неговата AH ( "ранни протеини") или ДНК, както и откриване на IgA антитела.
Откриване на специфични антитела на вируса помага при признаването на заразяване на хора с CMV, но поради дългия период на нарастване на титъра на антитела след инфекция, последващото дълго поддържане на кръвта им, трансплацентарната трансфер IgG антитела от майката на плода (идентифицирани в едно дете до 1,5 години) на диагностичната стойност изследванията са ограничени. Когато се наблюдава в динамиката (2-4 седмици), увеличаването на титъра на AT IgG 4 пъти показва активен CMV. Въпреки това, необходимостта от по-дългосрочен период на проследяване (4 седмици) и способността да се спаси от висок титър на антитела в продължение на няколко години, ограничаване на използването на този подход към диагнозата.
Допълнително проучване за увреждане на мозъка, причинено от CMV, може да бъде паралелното откриване на IgG в периферната кръв и CSF чрез ELISA с последващо изчисление на тяхното съотношение. Стойността на съотношението ни позволява да идентифицираме интратекалното производство на АТ и съответно участието на ЦНС в инфекциозния процес.
Имуноблот позволява откриването на IgM и IgG антитела срещу специфични протеини на CMV, потвърди специфичността на изследването, да наблюдава динамиката на появата и изчезването на определени протеини, които имат висока диагностична и прогностична стойност. Присъствието на АТ на отделен AG вирус потвърждава образуването на имунен отговор към CMV.
Показания за използването на различни лабораторни изследвания и тълкуване на резултатите от тях в различни категории
Диагностика на първична инфекция, включително по време на бременност, е възможно само при пациенти, които нямат AT-CMV в кръвта си. Независимо от клинично заболяване изпълнение, когато първичен CMV инфекция открива прави линии (присъствие на вирус, ДНК или АН) и непряко (AT-CMV) лабораторни маркери на активен CMV репликация. При изследване на пациенти със съмнителна активна CMV и явна форма на заболяване (CMV заболяване) е необходимо количествено определяне на съдържанието на CMV ДНК в кръвта. Определяне на CMV ДНК в цереброспиналната течност, плеврална течност, BAL, бронхиални биопсии, биопсии на органи, извършени в присъствието на съответния орган патологията.
Идентификация на директни маркери за вирусна репликация (виремия, ДНК или АХ) показва инфекция. Откриването на ДНК на CMV или AH вируса в кръвта на бременна жена е основният показател за висок риск от фетална инфекция и развитието на вродена CMV.
Отсъствие на AT-CMV IgM, IgA и IgG означава липсата на CMV в организма. Въпреки това, при индивиди с тежък имунен дефицит при активната репликация на CMV, производството на специфичен АТ може да бъде намалено до неоткриваемо ниво.
Идентификация на AT-CMV от различни класове позволява да се определят фазите на инфекциозния процес (репликативен или латентен). IgM Ig често се оценява като маркер на първична херпес-вирусна инфекция. При откриване на IgM Ig за потвърждаване на инфекцията с CMV се препоръчват допълнителни изследвания: определяне на АТ IgA или авидност на AT IgG, откриване на АТ на отделни протеини с използване на имуноблот; повторно изследване на жена или дете след 2 седмици. Откриването на АТ IgA и / или ниско-АТ IgG потвърждава наличието на инфекция. При повторното идентифициране на IgM Ig и отсъствието на IgA и / или ниско IgG Ig, резултатът от откриването на Ig IgM се смята за фалшиво положителен.
Откриване на IgM и IgG антитела към ранни антигенни протеини и ниско-АТ IgG антитела означава първичен процес на инфекция.
Откриване само на Ig IgG не позволява да се характеризира периодът на заболяването. При наличие на имуносупресия на класическото (4-кратно) увеличение на Ig IgG по време на релапс не се наблюдават.
Установяване на факта на фетална инфекция се извършва въз основа на ДНК откриване на CMV. Избор на биологичен материал се определя от това, продължителността на бременността, което определя възможността за извършване на конкретен метод инвазивна пренатална диагноза: околоплодна течност - 16-23 седмици, кръвта от пъпната връв - 20-24 седмици. Непрякото потвърждаване на факта на инфекция на плода е откриването на АТМ IgM и / или АТ IgA в кръвта от пъпна връв (проучването е възможно от 22-та седмица на бременността).
Лабораторна диагностика на вроден CMVI базиран на засичането на CMV, ДНК или хипертония при различни биологични материали (периферна кръв, урина, слюнка, тампони и тампони от орофарингеална, CSF) и идентификация на серум или плазма антитела IgM и IgA кръв по време на първите 7 дни след раждането. Провеждането на изследването на по-късна дата не позволява да се разграничи вродената и придобитата инфекция. Откриване на CMV ДНК или хипертония вирус в кръвта, урината, останки от лигавицата на устната кухина след 4-6 седмици от живота в отсъствието на вируса в първите 2 седмици на говори за intrapartum или началото postanatalnom инфекция. Потвърждаването на проявата на CMVI при деца през първите месеци от живота е наличието на CMV ДНК в кръвта.
Когато съмнителни резултати от допълнителна диагностична информация може да осигури откриване на IgM антитела срещу специфични протеини на антигени на вируса на имуноблотинг. Липсата на AT-CMV при деца с вродена цитомегаловирусна инфекция може да е свързано с развитието на имунологична толерантност към AG цитомегаловирус (CMV инфекция не е придружено от ефективен синтез на AT-CMV).
При изследване на деца в пост-новородени години (класически или модифициран вирусологичен метод), неговата ДНК или АХ ("ранни протеини") и АТМ IgM и IgA. Откриването на анти-CMV IgM при деца от първите седмици от живота се счита за критерий за вътрематочна инфекция с вируса. Недостатъкът при определянето на Ig IgM е тяхното често отсъствие в кръвта в присъствието на активен инфекциозен процес и не по-рядко фалшиви положителни резултати. При изследване на деца на възраст под 4-6 месеца от живота е препоръчително да се определи едновременно АТ при дете и майка и след това да се сравнят размерите на тяхното ниво (титър) и естеството на жестокостта. При разглеждане на дете на възраст над 6 месеца може да се изследва само кръвта на детето. За да се изключи CMVI при деца от първата година от живота, се препоръчва да се определи ДНК или АХ в урината.
Откриването на Ig Ig в серума на новородено без сравнение с нивото на АТ в кръвта на майката не е диагностично, поради възможността за трансплацентарен трансфер от майчиния организъм. Само при динамично сравнение (в интервал от 14-21 дни) на нивото на ATG IgG на новородено дете с нивото на AT IgG в кръвта на майката, може да се прецени тяхната природа. Ако IgG титри на антитела в детето при раждане са майката, и в преразглеждането след 3-4 седмици надолу около 1.5-2 пъти АТ идентифицирани в едно дете е родител.
Проверка на бременни жени - откриване на АТМ IgM и ниско-АТ IgG. За да се изключи реактивацията, определянето на AT Ig и нискостепенния АТ IgG е целесъобразно.
Изследване на пациенти с имунна недостатъчност подозира активен CMV инфекция и симптоматично форма на болестта (CMV заболяване) включва хистологично изследване на биопсия материал за откриване на цитомегаловирус (Н & Е оцветяване) откриване на CMV ДНК в цереброспиналната течност, плеврална течност, BAL, бронхиална биопсия, биопсии на вътрешните органи с подходящ орган патология; откриване на AH CMV в кръвта, определяне на концентрацията на CMV ДНК в кръвта чрез PCR. При диагностицирането на CMV инфекция при HIV-инфектирани най информационен присъствие на CMV ДНК в кръвта при висока концентрация (кръвна плазма> 10,000 копия / мл, в левкоцити> 1000 копия / 105 бели кръвни клетки).
PRC анализ за цитомегаловирус
Цитомегаловирусната инфекция е една от най-разпространените ППИ в света.
Според медицинската статистика, тя заразява около 50-100% от населението на цялото земно кълбо.
Причиняващото средство на тази инфекция е цитомегаловирус (CMV) от семейството на херпесвирусите.
Инфекцията с цитомегаловирус може да възникне по следните начини:
- Когато правите секс с инфектиран партньор
- Чрез слюнка с целувки
- Вътреутромен път през плацентата на заразена майка
- С кръвопреливане
- Когато трансплантация на костен мозък или трансплантация на вътрешни органи от заразен донор
Проявлението на тази СПИ обикновено няма никакви типични признаци.
Във връзка с това, което често се смесва с банална дихателна инфекция от типа ARVI.
Например, обострянето на CMV може да бъде придружено от такива симптоми като:
Поради това е възможно да се диагностицира наличието на тази инфекция само чрез лабораторни тестове.
Методите за лабораторна диагностика на цитомегаловирус са PCR
Един от най-точните и надеждни методи за лабораторна диагностика на цитомегаловирус е PCR.
Тази техника се основава на откриването в биологичния материал на генома на патогена - регион на ДНК молекулите на вируса.
Това се постига чрез неговата многократна репликация (умножаване), улесняваща откриването на инфекциозен агент.
PCR анализът за цитомегаловирус позволява откриване на вирус
в пробата за изпитване, дори и при ограничената концентрация в нея.
Анализът на цитомегаловирус чрез PCR има следните предимства пред други диагностични методи:
- Висока точност и чувствителност - грешката в изследването не надвишава 3-5%
- Възможността за идентифициране на патогена в ранните етапи на инфекцията
- Идентифициране на инфекцията в нейния латентен поток
- Откриване на вируса в устойчивата форма на инфекциозния процес
За PCR анализ за използване на цитомегаловируси:
- слюнка
- кръв
- урина
- храчка
- Освобождаване от уретрата или влагалището
- Цереброспинална течност
- Кърмата
Негативен PCR анализ за цитомегаловирус
означава, че ДНК на вируса не е намерена в интересуващия ни материал.
Това означава, че човек е здрав, а също така не е носител на вируси.
За това как преминава PCR
цитомегаловирус казва
лейтенант полковник на медицинската служба,
доктор Ленин Сергей Генедиевич
Положителен цитомегаловирус
означава, че в пробата е открит цитомегаловирус.
Това означава, че човекът, от който е взет материала, е болен или е носител на вируса.
Диагностиката на CMV чрез PCR има недостатъци -
това е ниска специфичност и ниска прогностична стойност.
- да се изясни предписанието за заразяване с вируса,
- определя степента на неговата патогенност и агресивност,
- прогнозират по-нататъшния ход на заболяването
прилага имунологичния метод - ELISA.
По време на такова проучване антитела - специфични имуноглобулини (класове М и G) се откриват в кръвта на пациента.
Въз основа на открития тип имуноглобулини, определете в какъв стадий на заболяването.
Каква е степента на тежест на нейното проявление.
Освен това, с помощта на ELISA, се определя дали инфекцията е предимно замърсена или антителата, открити в кръвта, са резултат от стара инфекция.
Наред с PCR и ELISA се използва тест за култивиране за диагностициране на цитомегаловирусна инфекция.
В хода на който патогенът се отглежда на специална хранителна среда и впоследствие се идентифицира.
Този метод също е ценен за едновременното определяне на чувствителността на патогена към антивирусните лекарства.
Преминете PCR анализа за цитомегаловирус, посъветвайте се с опитен венеролог и се подлагайте на ефективно лечение, което можете да обърнете към платената ни KVD.
За лечение на цитомегаловирус, моля свържете се с автора на тази статия - венеролог, уролог в Москва с 15-годишен опит.